Likit Kromatografi

HPLC (High Performance Liquid Chromatography) Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi kısaca HPLC olarak adlandırılır. Yüksek performans, yüksek resolüsyonu (ayrımı) ifade eder.

HPLC cihazı, analitik ayırma teknikleri amacı ile en yaygın kullanılan cihazdır. Bir karışımdaki bileşenlerin ayrılmasında sıvı hareketli faz kullanır. Bu bileşenler ilk olarak çözücüde çözülürler ve daha sonra yüksek basınç altında kromatografi kolonundan geçmeye zorlanırlar. Yaygın kullanılma sebepleri arasında; duyarlılığı, kantitatif tayinlere kolaylıkla uyarlanabilir olması, uçucu olmayan veya sıcaklıkla kolayca bozunabilen bileşiklerin ayrılmasına uygunluğu başta gelir. En önemlisi ise sanayinin birçok bilim dalının ve toplumun birinci derecede ilgilendiği maddelere geniş bir şekilde uygulanabilirliğidir. Bu tip bileşiklere örnek olarak amino asitler, proteinler, nükleik asitler, karbonhidratlar, ilaçlar ve pestisitler verilebilir.

 Yüksek basınçlı sıvı kromatografisi gıda ve içecek endüstrisi, çevre mühendisliği konuları, tıp, petrokimya, ziraat, tüketim maddeleri, endüstriyel kimya, farmakoloji vb. çok çeşitli alanlarda kimyasal ayırım, saflaştırma, tespit etme ve miktar belirleme amacıyla kullanılır.

Likit Kromatografi Hakkında Bilinmesi Gerekenler

UHPLC’nin Avantajları

• Küçük boyutlu paslanmaz çelik kolonların kullanılabilmesi,
• Partikül boyutları çok küçük kolonları kullanılması,
• Yüksek iç basınç ve kontrollü akış hızı sağlanabilmesi,
• Numune gereksinimlerinin az olması,
• Sürekli akış dedektörleri ile küçük miktarların tayinine olanak sağlaması,
• Hızlı analiz imkanı ve yüksek ayırma gücüne sahip olması,
• Analiz süresi kısadır.

HPLC Uygulama Alanları

İlaçlar: Antibiyotikler, sedafitler, steroitler, analjezikler

Biyokimysallar: Aminoasitler, karbonhidratlar, proteinler, lipitler

Gıda Maddeleri: Suni tatlandırıcılar, antioksidanlar, alfatoksinler

Endüstriyel Kimyasallar: Çok halkalı aromatikler, boyalar, yüzey aktif maddeler

Kirleticiler: Pestisitler, herbisitler, fenoller

Uyuşturucular: Uyuşturucu ilaçlar, zehirler, narkotikler

Klinik Tıp: Safra asitleri, ilaç metabolitleri, üre ekstraklar vb.

Hplc’nin Kısımları

• Hareketli faz rezervuarı
• Pompa
• Enjektör
• Kolon
• Dedektör
• Yazılım

Ayırma kolonda gerçekleşir. Durgun faz μm boyutlu partiküllerden oluşur, bu nedenle hareketli fazın kolondan geçişi için yüksek basınç pompalarına ihtiyaç vardır.

Kromatografik proses, kolona numunenin enjeksiyonu ile başlar.

Bileşenlerin ayrılması analit ve hareketli fazın kolona pompalanması ile devam eder.

Ayrılarak elde edilen her bir kompenentin pikleri kaydedilir.

Her bir komponent için alınan dedektör cevabı bir kaydedici veya bilgisayar ekranında kromotogram olarak görüntülenir.